Сотрудники Федерального центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», Казань) разработали способ получения очищенного антигена аденовируса первой подгруппы аденовирусной инфекции крупного рогатого скота. Работу провели в 2024 году в лаборатории вирусологии центра. Разработка нацелена на создание высокочувствительных тест-систем для иммуноферментного анализа (ИФА), которые позволяют выявлять специфические антитела в сыворотке крови животных.
Зачем нужна новая методика
Аденовирусная инфекция распространена в крупных молочных и мясных комплексах и нередко протекает в виде смешанных инфекций вместе с ринотрахеитом, вирусной диареей, парагриппом-3 и реовирусами. При этом аденовирусы могут играть первостепенную роль в развитии патологии. Диагностику осложняет генетическое разнообразие возбудителя: классифицировано 11 типов, относящихся к родам Mastadenovirus и Atadenovirus. Для решения проблемы требуются простые и чувствительные методы, отвечающие требованиям иммуноферментных тест-систем.
Этапы получения антигена
Авторы предложили схему, включающую несколько стадий: приготовление маточной расплодки вируса на перевиваемой клеточной линии ВНК-21/13, наработку биомассы роллерным культивированием, разрушение инфицированных клеток ультразвуком и осаждение антигена полиэтиленгликолем ПЭГ-6000. Финальную очистку выполняли ультрацентрифугированием в ступенчатом градиенте хлористого цезия. Такая последовательность позволила получить вирусную массу с инфекционной активностью 4,75±0,03 lg ТЦД50/мл и снизить содержание балластных белков.
Справка: Аденовирусная инфекция КРС вызывается 11 типами вирусов. К роду Mastadenovirus относятся BAdV-1, BAdV-2, BAdV-3, BAdV-9 и BAdV-10, к роду Atadenovirus — BAdV-4, BAdV-5, BAdV-6, BAdV-7, BAdV-8 и BAdV-Rus.
Результаты исследования
Из очищенного материала выделили три антигенные фракции. Наиболее перспективным признан препарат № 1: при разведении положительной сыворотки 1:200 его оптическая плотность составила 1,271±0,030 ОЕ, а отношение сигналов положительной и отрицательной сывороток — 9,08. В препаратах обнаружили полипептиды молекулярной массой 35–50 кДа, основная активная часть — белки 50 и 45 кДа.
Проверка на кроликах породы шиншилла показала прирост титров специфических антител до 1:400–1:3200 на 45-е сутки после иммунизации. Это подтверждает антигенную специфичность очищенного протеина и возможность его использования в качестве иммунизирующего агента.
Важно! Разработанный способ получения очищенного антигена аденовируса КРС может ускорить создание отечественных тест-систем ИФА для серологической диагностики смешанных респираторных и кишечных инфекций на молочных и мясных фермах.
Перспективы применения
Авторы отмечают, что дальнейшие исследования протективного потенциала выделенных антигенов открывают возможность их применения не только в тест-системах ИФА, но и в качестве компонентов вакцин против аденовирусной инфекции КРС. Способ может использоваться для получения антигенных препаратов других вирусов, опасных для сельскохозяйственных животных.
🔗 Источник: Отраслевой портал «Аграрная наука»